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        • 蛋白質純化試劑GST標簽純化樹脂(GST Resin)
        產品名稱:

        蛋白質純化試劑GST標簽純化樹脂(GST Resin)

        產品品牌: 索萊寶 價格:
        廠商性質: 生產廠家 產品時間: 2016-04-12
        蛋白質純化試劑GST標簽純化樹脂(GST Resin)
        貨號 :P2020
        規 格 :5ml/10ml
        保存 :4℃保存,有效期少一年
        產品簡介 :
        pGEX載體表達的外源蛋白與谷胱甘肽S-轉移酶融合, 因此可以通過谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析進行純化。

        產品概述

        蛋白質純化試劑GST標簽純化樹脂(GST Resin)
        貨號 :P2020
        規 格 :5ml/10ml
        保存 :4℃保存,有效期少一年


        產品簡介 :
            pGEX載體表達的外源蛋白與谷胱甘肽S-轉移酶融合, 因此可以通過谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析進行純化。
            GSTs 是一類以谷胱甘肽(γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸)作為底物,通過形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于 GST 對底物的親和力是亞毫摩爾級的,因此谷胱甘肽固化于瓊脂糖形成的親和層析樹脂對 GST 及其融合蛋白的純化效率很高??梢杂煤坞x谷胱甘肽的緩沖液洗脫結合 GST 融合蛋白。樹脂用 3mol/L NaCl 的緩沖液再生。
            谷胱甘肽瓊脂糖對 GST 融合蛋白的結合能力很強(每毫升柱床體積的樹脂能結合 8 毫克融合蛋白) 。

         

        特性:
        粒度:45-165um 流速:75cm/h
        工作 PH:4-10 耐壓:0.3Mpa
        載量:>5mg 谷胱甘肽 S-轉移酶


        使用說明 :
        谷胱甘肽樹脂的處理:
            1.輕輕顛倒盛有谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂的容器,將樹脂混成勻漿。
            2.取部分勻漿放入 15ml 聚丙烯管(每 100ml 細菌培養物大約需要 2ml 勻漿) 。
            3.4℃ 500 g 離心 5 分鐘,小心去掉上清。
            4.在樹脂中加入 10 倍柱床體積預冷的 PBS,顛倒數次混勻,4℃ 500 g 離心 5 分鐘,小心去掉上清。
            5.每毫升樹脂加入 1 毫升冷的 PBS,制成 50%勻漿,顛倒數次,混合均勻,懸液冰上放置待用。


        制備細胞抽提物 :
            6.每 100 毫升培養物的細胞沉淀重懸于 4mlPBS 緩沖液中。
            7.加入溶菌酶終濃度為 1mg/ml,冰上放置 30 分鐘。
            8.用針筒將 10ml 濃度為 0.2%的 TritonX-100 強行注入黏稠的細胞裂解物中,劇烈振動數次混勻。加入DNase 和 RNase 終濃度 5ug/ml, 4℃振動溫育 10 分鐘,4℃ 3000 g 離心 30 分鐘,去除不溶性細胞碎片,上清轉移到一只新管中,加入 DTT 終濃度1mmol/L。純化融合蛋白:
            9.細胞裂解物與適量 50%谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂勻漿混和,每 100 毫升細菌培養物加 2ml 樹脂,于室溫輕搖 30min。
            10.混合物于 4℃以 500 g 離心 5 分鐘,小心去掉上清并留樣少許進行 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳。
            11.沉淀中加入 10 倍柱床體積的冷的 PBS,顛倒離心管數次混勻,洗去未與樹脂結合的蛋白。
            12.4℃以 500 g 離心 5 分鐘,小心去掉上清并留樣少許進行 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳。
            13.重復步驟 11 和 12 兩次。
            14.結合的 GST 融合蛋白可用谷胱甘肽洗脫液洗脫, 也可用凝血酶、 腸激酶或 Xa 因子切割, 釋放靶蛋白。用谷胱甘肽洗脫融合蛋白 :
            a.沉淀中加入 1 倍柱床體積的谷胱甘肽洗脫緩沖液,室溫輕輕攪動 10min,洗脫樹脂上結合的蛋白。
            b. 4℃以 500 g 離心 5 分鐘,上清(含洗脫的融合蛋白)移新管中。
            c.重復步驟 a 和 b 兩次,合并 3 次上清。


        蛋白酶解從結合的 GST  融合蛋白上回收靶蛋白 :
            a.  在結合了融合蛋白的樹脂中加入凝血酶、腸激酶或 Xa 因子(根據融合蛋白中的位點選擇) ,每 ml樹脂加入 50 單位溶于 1mlPBS 的蛋白酶。顛倒離心管數次混勻,室溫下振蕩 2—16 小時。用小規模實驗確定時間。
            b.4℃以 500 g 離心 5 分鐘,上清小心移新管中。 (GST 仍結合在樹脂上,而靶蛋白在上清中,蛋白酶也在上清中,仍需要分離)
           15.10% SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳分析每一步樣品的蛋白質組成。


        試劑配制:
        谷胱甘肽洗脫緩沖液:10mmol/L 還原型谷胱甘肽,50mmol/L Tris-Cl (pH8.0)


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        蛋白質純化試劑GST標簽純化樹脂(GST Resin)產品訂購說明:

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        運輸說明:

        1、極低溫產品:極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩定如一,為您的實驗保駕護航。
        2、低溫產品:低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴實密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩定如一,為您的實驗保駕護航。
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